ДНК-полимераза Taq

ДНК-полимераза Taq * ДНК-полімераза Taq * Taq DNA polymerase — термофильный фермент, осуществляющий репликацию ДНК, выделенный из термофильных бактерий Thermus aquaticus. ДНК-п. Taq часто применяется в методе полимеразной цепной реакции и при секвенировании ДНК по методу Сэнгера. Фермент обладает 51 → 31-экзонуклеазной активностью, но редакторская 31 → 51-экзонуклеазная активность у него отсутствует. Это приводит к появлению ошибочных включений in vitro с частотой 10-4 (в 100 раз чаще, чем фрагмент Кленова, включает в синтезированную нить ДНК нуклеотиды, некомплементарные матричной нити). Ген Taq-полимеразы был клонирован в E. coli. Период полужизни фермента при температуре 92,5 оС составляет 130 мин, а оптимальная температура полимеризации — 75-80 оС. Поэтому используют также ДНК-полимеразы Vent и Deep Vent, которые происходят, соответственно, из бактерий Thermococcus litoralis и Pyrococcus species GB-D, найденных в глубоководных термофильных источниках (vent — выход, отверстие). Гены этих полимераз были клонированы, и ферменты выделяют из сконструированных для этих целей продуцентов. После прогрева до 95 оС ДНК-полимераза Vent сохраняет половину своей активности в течение 7, а Deep Vent — 23 ч. Эти полимеразы обладают 31 → 51-экзонуклеазной активностью, поэтому точность синтеза повышена на порядок по сравнению с Taq-полимеразой. Однако изза этой активности они могут утрачивать праймеры, поэтому для синтеза относительно коротких фрагментов ДНК, напр., при секвенировании, используют полимеразы с инактивированной экзонуклеазной активностью.